李 勇 王军波 郑丽萍北京大学医学部营养与食品卫生系，北京 １０００８３
摘 要：目的 探讨５１０－亚甲基四氢叶酸还原酶及甲硫氨酸合酶还原酶基因多态性与先天性心脏病
ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ ＣＨＤ之间的关系。方法 收集１７３个先心病核
心家庭及９７个健康对照核心家庭，盐析法提取基因组ＤＮＡ，用ＰＣＲＲＦＬＰ方法确定ＭＴＨＦＲ、
ＭＴＲＲ基因型。结果 按先心病发病类型分组后，与对照组相比，动脉导管未闭、房间隔缺损病人ＭＴＨＦＲ
６７７ＴＴ基因型频率分别是４２．９％和５４．５％显著高于对照（２３．３％）
ＯＲ值为２．４７、３．９５；动脉导管未闭病人的母亲与对照组母亲相比，ＴＴ基因型频率显著高于对照
组母亲，分别为２４．５％ ４２．９％，ＯＲ值为２．３１。对得到的先心病核心家庭进行传递失衡检验、
基于单体型的单体型相对危险度ＨＨＲＲ进行统计，发现ＭＴＨＦＲ ６７７基因多态性不存在遗传失衡现象。
对１０２个核心家庭的ＭＴＲＲ６６位基因多态性分析，不存在遗传失衡现象。结论 ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ
基因型是ＣＨＤ尤其是动脉导管未闭、房间隔缺损发生的危险因素之一；母亲ＴＴ基因型是子代发生动脉导管未闭
的危险因素之一。
关键词：５１０亚甲基四氢叶酸还原酶ＭＴＨＦＲ；甲硫氨酸合酶还原酶ＭＴＲＲ；先天性心脏病；核心家庭；单核甘酸基因多态性
Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅＬＩ Ｙｏｎｇ Ｗａｎｇ Ｊｕｎｂｏ Ｚｈｅｎｇ Ｌｉｐｉｎｇ Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｏｏｄ Ｈｙｇｉｅｎｅ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｅｋｉｎｇ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３ Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｌａｒｉｆｙ ｔｈｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＴＨＦＲ，ＭＴＲＲ ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ＣＨＤ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ １７３ ｆａｍｉｌｙ ｔｒｉａｄｓ ｏｆ ｍｏｔｈｅｒ ｆａｔｈｅｒ ａｎｄ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｌｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｓｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ９７ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ． Ｖｅｎｏｕｓ ｂｌｏｏｄ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｏｓｅ ｓｕｂｊｅｃｔｓ． ＭＴＨＦＲＣ６７７Ｔ ａｎｄ ＭＴＲＲ Ａ６６Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｅａｃｈ ｓａｍｐｌｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＰＣＲＲＦＬＰ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｔｈｏｓｅ ｗｈｏ ｗｅｒｅ ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉｏｓｕｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ａｔｒｉａｌ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ４２．９％ ５４．５％ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ２３．３％ ＯＲ ｖａｌｕｅ ２．４７３．９５． ＴＴ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｍｏｔｈｅｒｓ ｗｈｏ ｈａｄ ｇｉｖｅｎ ｂｉｒｔｈ ｔｏ ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉｏｓｕｓ ｃｈｉｌｄ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｔｈｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌＯＲ２．３１，９５％ＣＩ：１．０３５．１８． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ＭＴＨＦＲ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ＣＨＤ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｍｉｌｙ ｄａｔａ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｄｉｓｅｑｕｉｌｌｉｂｒｉｕｍ ｔｅｓｔ ＴＤＴ ａｎｄ Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ Ｂａｓｅｄ Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｒｉｓｋ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｂｏｔｈ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｙｉｅｌｄｅｄ ｎｏｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐａｒｅｎｔｓ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｍｏｒｅ Ｔ ａｌｌｅｌｅ ｏｆ ＭＴＨＦＲ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ＣＨＤ ｃｈｉｌｄｒｅｎ Ｐ＞０．０５。Ｎｏ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ＭＴＲＲ ａｓ ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅａｒｔ ｂｙ ａｎａｌｙｚｉｎｇ １０２ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｗｉｔｈ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｌｄｒｅｎ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ ｗａｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ＣＨＤ ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉｏｓｕｓ ａｎｄ ａｔｒｉａｌ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｗｅ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｇｅｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｔｈａｔ ＭＴＲＲ Ａ６６Ｇ ｗａｓ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ＣＨＤ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｔｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅＭＴＨＦＲ Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅＭＴＲＲ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅＣＨＤ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｍｉｌｙ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
先天性心脏病（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ，简称先心病，ＣＨＤ）是婴幼儿心脏疾患中最常见的疾病。除少数先心病是由单基因突变和染色体畸变引起外，大多数先心病是由遗传因素和环境因素相互作用引起的多基因遗传病。妇女在怀孕前后补充多族维生素尤其是叶酸可以有效的预防神经管畸形的发生，还可显著的降低先心病的发生率。而大多数生有神经管畸形患儿的孕妇其体内叶酸并未缺乏，认为叶酸代谢的异常是神经管畸形发生的主要原因。
同型半胱氨酸ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，Ｈｃｙ是甲硫氨酸代谢中产生的一种含硫醇的氨基酸，其代谢处于再甲基化作用和转硫化作用这两个代谢途径的交叉点。ＭＴＨＦＲ是参与Ｈｃｙ代谢的关键酶之一，催化５１０亚甲基四氢叶酸还原为５甲基四氢叶酸，后者是体内主要的甲基供体，参与核酸合成的一碳单位转移。ＭＴＨＦＲ基因第６７７位核苷酸具有多态性并对酶活性有影响，酶活力实验证明６７７ＴＴ型ＭＴＨＦＲ平均活力约为ＣＣ型的３０％，而ＣＴ型约为ＣＣ型的６５％。该酶的缺陷可导致５甲基四氢叶酸合成减少，使Ｈｃｙ不能甲基化为蛋氨酸而造成堆积。目前对ＭＴＨＦＲ与先心病的病例对照研究结果表明，母亲、子代的ＭＴＨＦＲ６７７Ｃ→Ｔ突变与先心病的发生有统计学关联。
ＭＴＲＲ是维持依赖于ＶｉｔＢ１２的蛋氨酸合酶活性状态的黄素蛋白，该酶涉及蛋氨酸合酶、ＶｉｔＢ１２的代谢，即同型半胱氨酸甲基化的代谢，可能导致同型半胱氨酸的蓄积。ＭＴＲＲ６６Ａ→Ｇ，导致异亮氨酸（Ｉ）改变为蛋氨酸（Ｍ）。ＭＴＲＲ ６６ＡＡ 基因型可中度升高同型半胱氨酸水平，且此作用独立于血清叶酸、ＶｉｔＢ１２、ＶｉｔＢ６水平；与６６ＧＧ纯合子相比，携带６６ＡＡ基因型的人患心血管疾病的可能性要升高４％。ＭＴＲＲ这一多态性位点增加了ＮＴＤｓ发生的危险性。
本研究目的旨在利用核心家庭资料探讨ＭＴＨＦＲ和ＭＴＲＲ两种基因多态性与先心病的关系。
１ 研究方法
１．１ 研究对象
先心病病人年龄为２０岁以下者，父母年龄为２３～５９岁，均来自辽宁省的各个市县。父母均是子代的亲生父母，即“生物学父母”，剔除养父母和继父母。
先心病患儿的确定：有典型的临床表现，经心脏超声或手术确诊，由心血管专科医生进行判断，以明确先心病。对照组子代同样是经过Ｘ线、心脏超声检查确定无先心病及其他畸形的健康人并与病例年龄相近且处于同一地区。研究中排除在怀孕前后患有糖尿病、苯丙酮尿症及孕早期服用致畸药物和接触过放射线的母亲。两组母亲怀孕前３个月上呼吸道感染发生率、异常孕产育史、接触农药史在统计学上无差异。
１．２ 资料收集
对所有参与现场流行病学调查的人员进行统一培训。由负责医生填写登记表，登记表包括父母、子代的姓名、年龄、民族等一般情况及母亲的异常孕产育史、孕期患病、服药、接触射线、农药等可导致因素。护士按照登记表，采集静脉血２ｍｌ并制备成抗凝血，保存于－７０℃冰箱中。
１．３ 基因型检测
用盐析法提取血液中的ＤＮＡ，聚合酶链反应－限制性酶切片段长度多态（ＰＣＲＲＦＬＰ）方法检测基因型。
扩增包括６７７位点的ＭＴＨＦＲ基因所用的引物为５’ＴＧＡ ＡＧＧ ＡＧＡ ＡＧＧ ＴＧＴ ＣＴＧ ＣＧＧ ＧＡ３’（ｓｅｎｓｅ），５’ＡＧＧ ＡＣＧ ＧＴＧ ＣＧＧ ＴＧＡ ＧＡＧ ＴＧ３’ａｎｔｉｓｅｎｓｅ。ＰＣＲ反应条件参考文献１１将ＰＣＲ产物用限制性内切酶Ｈｉｎｆ Ｉ于３７℃消化４小时以上，酶切产物在１２％聚丙烯酰胺凝胶上电泳（１５０Ｖ将凝胶浸入０．５μｇｍｌ的 ＥＢ水溶液１０ｍｉｎ进行染色。
扩增包括６６位点的ＭＴＲＲ基因所用引物为５’ＧＣＡ ＡＡＧ ＧＣＣ ＡＴＣ ＧＣＡ ＧＡＡ ＧＡＣ ＡＴ３’ｓｅｎｓｅ，５’ＧＴＧ ＡＡＧ ＡＴＣ ＴＧＣ ＡＧＡ ＡＡＡ ＴＣＣ ＡＴＧ ＴＡ３’ａｎｔｉ ｓｅｎｓｅ，ＰＣＲ反应条件同ＭＴＨＦＲＣ６７７Ｔ，用Ｎｄｅ Ｉ 酶切，酶切产物在２０％聚丙烯酰胺凝胶上电泳（６０Ｖ），ＥＢ溶液染色。
１．４ 统计分析
用ＳＰＳＳ １１．０和Ｅｐｉ ２０００软件进行统计分析。分析内容为：比较两组各类先心病病人、其父亲、母亲ＭＴＨＦＲ６７７ＴＴ基因型频率；核心家庭基因型组合基本统计，计算传递失衡指数（ＴＤＴ）及基于单体型的单体型危险度（ＨＨＲＲ）。
２ 研究结果
２．１．１ ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡检验
根据ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ定律，比较对照组父母、子代ＭＴＨＦＲ ６７７位点各基因型的实得数与预期数，经卡方检验，父母和子代的ＭＴＨＦＲ ６７７位点基因型构成均符合遗传平衡定律，表明本研究对照的位点多态性已达到遗传平衡，具群体代表性。
２．１．２ 按先心病类型分层进行分析
由于不同类型的先心病其发病原因可能会有所不同，此研究按心脏畸形发生部位将先心病进行分类。其它类型先心病样本例数较少，未列入表中进行统计。动脉导管未闭病人的母亲ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型频率明显高于对照，其余类型先心病人母亲ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型频率与对照组相比，差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。动脉导管未闭、房间隔缺损病人ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型频率明显高于对照，Ｐ＜０．０５。
２．１．３ 分别控制母亲、子代基因型，ＴＴ基因型与先心病的关系
分别将ＣＨＤ的母亲基因型按ＴＴ与非ＴＴ基因型分组，将ＣＨＤ患者与假对照即把父母未传递给ＣＨＤ患儿的一对等位基因作为假对照的基因型按配对资料整理，或子代基因型按ＴＴ与非ＴＴ基因型分组，将ＣＨＤ患者的母亲与对照按非匹配病例对照研究资料整理，并进行卡方检验。统计结果显示，Ｐ＞０．０５，差异无显著性。这说明即使控制母亲或子代基因型，消除母亲（或子代自身）基因型对先心病发生的影响，也未发现ＴＴ基因型与子代先心病的发生有关联。
２．１．４ 母亲、子代均是ＴＴ基因型的危险性
由表２可知，病例组母亲子代同时是ＴＴ基因型组合１８．８％的构成高于对照组（１２．９％），但差异没有显著性（Ｐ＞０．０５）。
２．１．５ 先心病病人与假对照基因型构成比较
以ＣＨＤ病人基因型为病例基因型，未遗传给ＣＨＤ病人的一对等位基因为对照（假对照）的基因型，进行１１配对的病例对照研究。由表３可知，基因型构成比差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。说明先心病人的ＴＴ基因型构成并不高于正常人。
２．１．６ ＴＤＴ计算
以父母传递给ＣＨＤ病人的染色体等位基因为病例，未遗传给ＣＨＤ病人的一对等位基因为对照进行１１配对的病例对照研究，计算传递失衡指数（ＴＤＴ），见表４。
在这种检验方法中，其统计量ＴＤＴ只考察基因型为杂合子的父母纯合突变型和正常纯合子父母的资料记入到“ａ、ｄ”，为无效信息。
还有一种比较在核心家庭内传递和未传递等位基因频率的方法是对ＴＤＴ方法的改进。利用父母的基因型组合为ＣＴ×ＣＴ，ＴＴ×ＣＴ，ＣＴ×ＴＴ的资料，即父亲和母亲每人至少有一个Ｔ等位基因，以使子代的基因型可能为ＴＴ。此次收集到的属于这两种基因型组合的家庭，共有１０６个，基因型为杂合子的父母总数为１５６人，Ｔ等位基因传递给子代的次数为７５（４８．８％），Ｃ等位基因传递次数８１次（５１．２％），χ２＝０．２３，Ｐ＞０．０５。
２．１．７ ＨＨＲＲ统计
上述两种方法只用了父母基因型为杂合子数据，对资料有某种程度的浪费，为了充分利用基因信息，在这类研究中，除了计算ＴＤＴ外，同时对配对资料按照成组比较的病例对照研究方法进行整理，进行Ｍｃ Ｎｅｍａｒ检验，其χ２值与上述“传递失衡系数”相对应，称为“基于单体型的单体型相对危险度”统计量ＨＨＲＲ。由表５得，ＨＨＲＲ（χ２）＝１．０１，Ｐ＝０．３１＞０．０５ ＯＲ＝０．８６，９５％ＣＩ＝０．６３～１．１７。
２．２ ＭＴＲＲＡ６６Ｇ基因多态性与ＣＨＤ的关系
２．２．１ 对１０２份ＣＨＤ核心家庭进行ＭＴＲＲ Ａ６６Ｇ基因多态性与ＣＨＤ的关系研究，将 核心家庭父、母、子代ＭＴＲＲ基因型组合统计，见表６。
２．２．２ 计算传递失衡指数ＴＤＴ
从表６计算出，１０２份核心家庭中，ＭＴＲＲ基因型为杂合子的父母共有９７人，Ｇ等位基因传递给子代的次数为５２（５３．６％），Ａ等位基因传递次数４５次（４６．４％），
２．２．３ ＨＨＲＲ统计
对ＭＴＲＲ基因型按照成组比较的病例对照研究方法进行整理，进行χ２ 检验，计算统计量ＨＨＲＲ，即χ２ 值。父母传递给子代的Ｇ等位基因６７次，Ａ等位基因１３７次，未传递给子代的Ｇ等位基因６０次，Ａ为１４４次。统计结果为，ＨＨＲＲ（χ２ ）＝０．５６，Ｐ＞０．０５，说明父母并没有将Ａ等位基因过多的传递给先心病的患儿。
３ 讨论
先心病的种类十分繁杂，病变形态或简单或复杂，所在的部位也多种多样，故引起各种类先心病发生的病因有可能不一样。因此，在样本例数足够的情况下，应该对每一亚类先心病的病因分别分析。本研究是按畸形部位来进行分类，包括室间隔缺损、房间隔缺损、动脉导管未闭、法乐四联征等。
按上述几类ＣＨＤ进行分组，各类先心病患儿父亲的ＭＴＨＦＲ ６７７位基因型构成及ＴＴ基因型频率与对照组的父亲基因型构成、ＴＴ基因型频率相比，差异均没有显著性（Ｐ＞０．０５）。
动脉导管未闭病人的母亲ＴＴ基因型频率显著高于对照组，Ｐ＝０．０３９，ＯＲ值为２．３１９５％ＣＩ＝１．０３～５．１８。
本研究发现动脉导管未闭、房间隔缺损病人ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型频率显著高于对照组子代的ＭＴＨＦＲ６７７ＴＴ基因型频率，ＯＲ值分别为２．４７（９５％ＣＩ＝１．０２～６．００）３．９５９５％ＣＩ＝１．３８～１１．４４，Ｐ＜０．０５；其余类型先心病人ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型频率与对照无显著性差别（Ｐ＞０．０５）。Ｊｕｎｋｅｒ等８对ＭＴＨＦＲ ６７７位基因多态性与先心病发生之间的关系作了研究，认为ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型与先天性心脏结构畸形的发生显著相关，特别是肺动脉狭窄、左心发育不良综合症、主动脉缩窄，但此研究中，这３类先心病病人个数分别为３、６、１６，样本例数相对较少。Ｗｅｎｓｔｒｏｍ７的研究显示先心病的发生与羊水中同型半胱氨酸浓度升高、母亲ＭＴＨＦＲ６７７Ｃ→Ｔ有关。而刘虹等人对先心病病人母亲与对照母亲的ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型频率（病例３０％，对照１５％）及Ｔ等位基因频率（病例５６％，对照５３％）进行比较，发现两组差异无显著性１２。结合本研究结果，ＭＴＨＦＲ６７７Ｃ→Ｔ基因多态性是否与先心病的发生有关还有待于进一步研究。
以父母为对照的病例对照研究本质上是一种配对研究这种方法的实质是以患儿的两个等位基因作为“病例”以父母未传给胎儿的两个等位基因作为“对照”最大的优点是不必为病例寻找具有相同遗传背景的对照而可以克服遗传因素的种族差异的混杂作用而这种差异是遗传流行病学研究中非常重要的混杂因子之一。这种方法已越来越多地用于疾病候选基因的研究，它还能提供非统计学方面的优势，如更好协作、降低总的费用。
ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型的母亲同型半胱氨酸会升高，后者通过胎盘发挥胚胎发育毒性１３，ＭＴＨＦＲ ６７７ＴＴ基因型的胎儿体内甲基供体减少同型半胱氨酸蓄积，阻碍其组织器官的发育。在分析子代基因型与先心病关系时，母亲的基因型可造成混淆；同理，在分析母亲基因型与先心病关系时，子代的基因型也可造成混淆。本研究分别控制母亲或子代基因型，分析子代或母亲基因型与先心病的关系，Ｐ值均大于０．０５，差异无显著性。本次对先心病核心家庭所进行的ＴＤＴ统计和ＨＨＲＲ统计，双侧检验Ｐ值均大于０．０５。这一结果说明，在先心病核心家庭中ＭＴＨＦＲ６７７位不存在突变基因（Ｔ）的遗传失衡现象，也就是说，不会由于父母将较大比例的突变基因Ｔ传给胎儿，使胎儿罹患先心病的可能性增高。
关于ＭＴＲＲ ６６位基因多态性与先心病的关系，虽然ＡＡ基因型与血中的Ｈｃｙ升高有关，可能会影响心脏发育，但通过此次研究，在先心病核心家庭中未发现Ａ等位基因的传递失衡现象。
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９． Ｌｅｃｌｅｒｃ Ｄ Ｗｉｌｓｏｎ Ａ Ｄｕｍａｓ Ｒ ｅｔ ａｌ． Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ａ ｃＤＮＡ ｆｏｒ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ａ ｆｌａｖｏｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｉｎ ｐｅｒｓｏｎｓ ｗｉｔｈ ｈｏｍｏｃｙｓｔｉｎｕｒｉａＪ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １９９８ ９５ ３０５９－３０６４．
１０． Ｗｉｌｓｏｎ Ａ Ｐｌａｔｔ Ｒ Ｗｕ Ｑ ｅｔ ａｌ． Ａ Ｃｏｍｍｏｎ Ｖａｒｉａｎｔ ｉｎ Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ Ｌｏｗ Ｃｏｂａｌａｍｉｎ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ１２ Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ Ｒｉｓｋ Ｆｏｒ Ｓｐｉｎａ ＢｉｆｉｄａＪ． Ｍｏｌ Ｇｅｎｅ Ｍｅｔａ １９９９ ６７３１７－３２３．
１１． Ｆｒｏｓｓｔ ＰＢｌｏｍ ＨＪＭｉｌｏｓ Ｒｅｔ ａｌ．Ａ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ Ａ ｃｏｍｍｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｊ． Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ １９９５ １０１１１－１１３．
１２． 刘虹、李松、叶鸿瑁、韩玲、孟昭亨、朱慧萍、郝玲、李勇．血浆同型半胱氨酸、叶酸、５１０－亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天性心脏病的相关性研究Ｊ． 中华围产医学杂志 ２００２ ５２１０２－１０５．
１３． 李勇，李松，陈光慧等． ＨＣＹ－２ 基因和同型半胱氨酸与鸡胚先天性心脏畸形发生的关系Ｊ． 中华医学杂志． ２０００ ２８０１３１－１３４．
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